SOP文件:臨床非培養(yǎng)標(biāo)本的采集及處理操作程序

1.目的

　　規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。

2.適用范圍

　　微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。

3.職責(zé)

　　3.1 所有采集標(biāo)本的人員均需按本SOP操作，實(shí)驗(yàn)室工作人員有責(zé)任向臨床醫(yī)生、護(hù)士或病人宣教。

　　3.2 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：室負(fù)責(zé)人、科主任。

4.操作程序

　　4.1 本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本為：血清或血漿、痰、生殖道拭子標(biāo)本、尿液及腦脊液和胸腹水。

　　4.2 做好標(biāo)本簽收，核對(duì)檢驗(yàn)單與標(biāo)本標(biāo)簽是否清楚無誤，送檢標(biāo)本是否正確、合格，給所有標(biāo)本按順序編號(hào)，按如下操作規(guī)程操作。

　　4.3 查找抗酸菌操作:將標(biāo)本置于水浴蒸箱加溫殺菌30分鐘，取標(biāo)本殘留物或沉淀物加溫涂布玻片，液性標(biāo)本以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取標(biāo)本殘留物或沉淀物加溫涂布玻片并標(biāo)注編號(hào)后固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加溫(用酒精燈在玻片下來回加溫置染色液冒熱氣，但無氣泡產(chǎn)生為宜)染色10分鐘，自來水沖洗凈染液，以硫酸美蘭復(fù)染2分鐘，水洗涼干。

　　鏡檢與報(bào)告：油鏡下查找分枝、不規(guī)則紅色桿菌，按如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果報(bào)告。

　　1)、鏡檢100-300個(gè)視野(時(shí)間不少于4分鐘)未發(fā)現(xiàn)抗酸菌，繼續(xù)觀察至300個(gè)視野仍未發(fā)現(xiàn)抗酸菌者報(bào)告抗酸菌(—);

　　2)、鏡檢100個(gè)視野找到抗酸菌1-2條者，報(bào)告抗酸菌可疑(±)，或重涂片或重送標(biāo)本檢查;

　　3)、鏡檢100個(gè)視野找到抗酸菌3-9條者，報(bào)告抗酸桿菌陽性(+);

　　4)、鏡檢10個(gè)視野找到抗酸菌1-9條者，報(bào)告抗酸桿菌陽性(2+);

　　5)、鏡檢每個(gè)視野找到抗酸菌1-9條者，報(bào)告抗酸桿菌陽性(3+);

　　6)、鏡檢每個(gè)視野找到抗酸菌多于9條者，報(bào)告抗酸桿菌陽性(4+)。

　　4.4 查找普通細(xì)菌操作：液性標(biāo)本取離心沉淀物涂片，拭子或膿性標(biāo)本直接涂布玻片并標(biāo)注編號(hào)后固定。同時(shí)取大腸標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC25922)和金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC25922)涂片，一起行革蘭氏染色，先滴加第一液染色1分鐘，水洗，加第二液媒染1分鐘，水洗干凈;以95%酒精脫色30秒鐘后立即水洗，再加第四液復(fù)染30秒鐘，水洗后涼干。油鏡下查找菌體并觀察球桿比例;觀察質(zhì)控菌是否合格。

　　4.5 墨汁染色查找隱球菌：液性標(biāo)本離心取沉淀物涂片，膿性或拭子標(biāo)本直接涂片并寫號(hào)，以無菌接種環(huán)粘取少量印度墨汁與玻片上標(biāo)本混勻，壓蓋玻片，先低倍鏡下找到視野再轉(zhuǎn)離倍鏡觀察。若找到透亮，圓形強(qiáng)折光，有厚莢膜的菌體報(bào)告墨汁染色陽性;否則報(bào)告陰性。

　　4.6 白帶常規(guī)檢查：鹽水管直接將棉簽點(diǎn)至玻片后以高倍鏡檢有無滴蟲;涂片標(biāo)注編號(hào)后固定，行革蘭氏染色，先滴加第一液染色1分鐘，水洗，加第二液媒染1分鐘，水洗干凈;以95%酒精脫色30秒鐘后立即水洗，再加第四液復(fù)染30秒鐘，水洗涼干后鏡檢查找革蘭氏陰性雙球菌、霉菌或陽性球菌、線索細(xì)胞等。陰道清潔度的按如下判斷標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告：

　　Ⅰ度：陰道桿菌為主，并可見大量上皮細(xì)胞。

　?、蚨龋河胁糠蓐幍罈U菌，但亦有部份膿細(xì)胞和雜菌，上皮細(xì)胞少見。

　　Ⅲ度：僅見少量陰道桿菌和上皮細(xì)胞，有大量膿細(xì)胞和雜菌。

　　Ⅳ度：鏡下無陰道桿菌，除少量上皮細(xì)胞外，主要的幾乎全是膿細(xì)胞和大量雜菌。

　　4.7 肥達(dá)試驗(yàn)：標(biāo)本標(biāo)明編號(hào)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘;取試管架，按每標(biāo)本排5排試管，每排5支;各標(biāo)本用加樣器取100μl血清置于一支稀釋用試管(注明檢驗(yàn)號(hào))中，加入1.9ml 0.9%生理鹽水混勻，第一排加入1：20倍稀釋血清各0.2ml，成1：40倍;后稀釋管再加入1.0ml 0.9%生理鹽水，成1：40倍稀釋，加入第二排試管各0.2 ml。同樣方法對(duì)倍稀釋至第四排試管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理鹽水作陰性對(duì)照。從冰箱中拿出肥達(dá)反應(yīng)試驗(yàn)稀釋菌懸液，第一列各加入H診斷菌液0.2 ml,第二列各加入O診斷菌液0.2 ml，第三列各加入甲型診斷菌液0.2 ml,第四列各加入乙型診斷菌液0.2 ml, 第五列各加入丙型診斷菌液0.2 ml,混勻，置37℃水浴箱18-24小時(shí)。

　　結(jié)果判斷：菌體沉淀至試管底成圓點(diǎn)為陰性管，出現(xiàn)散在顆粒狀凝集為陽性管。以最高稀釋管出現(xiàn)散在顆粒狀凝集為報(bào)告滴度。若陰性對(duì)照出現(xiàn)凝集則需重新稀釋配制診斷菌懸液重做試驗(yàn)。

　　4.8 外菲氏試驗(yàn)：標(biāo)本標(biāo)明編號(hào)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘;取試管架，按每標(biāo)本排3排試管，每排5支;各標(biāo)本用加樣器取100μl血清置于一支稀釋用試管(注明檢驗(yàn)號(hào))中，加入1.9ml 0.9%生理鹽水混勻，第一排加入1：20倍稀釋血清各0.2ml，成1：40倍;稀釋管留1.0ml再加入1.0ml 0.9%生理鹽水，成1：40倍稀釋，加入第二排試管各0.2 ml。同樣方法對(duì)倍稀釋至第四排試管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理鹽水作陰性對(duì)照。從冰箱中拿出外菲氏反應(yīng)試驗(yàn)稀釋菌懸液，第一列各加入OX19診斷菌液0.2 ml,第二列各加入OX2診斷菌液0.2 ml，第三列各加入OXK診斷菌液0.2 ml,混勻，置37℃水浴箱18-24小時(shí)。

　　結(jié)果判斷：菌體沉淀至試管底成圓點(diǎn)為陰性管，出現(xiàn)散在顆粒狀凝集為陽性管。以最高稀釋管出現(xiàn)散在顆粒狀凝集為報(bào)告滴度。若陰性對(duì)照出現(xiàn)凝集則需重新稀釋配制診斷菌懸液重做試驗(yàn)。

5.引用表格

　　5.1拒收標(biāo)本記錄表：

篇2:標(biāo)本采集人員工作職責(zé)

1.負(fù)責(zé)血液標(biāo)本的采集工作,嚴(yán)格無菌操作技術(shù),做到一針見血,防止引起獻(xiàn)血者的不適。

2.負(fù)責(zé)檢查一次性采血針管,嚴(yán)防使用不合格產(chǎn)品。

3.負(fù)責(zé)標(biāo)本采集前的核對(duì)工作,防止差錯(cuò)事故的發(fā)生。

4.負(fù)責(zé)標(biāo)本采集后體檢表及標(biāo)本的送檢工作,并做好交接記錄。

5.負(fù)責(zé)工作環(huán)境的衛(wèi)生工作。

篇3:臨床微生物標(biāo)本采集與送檢規(guī)范

臨床微生物標(biāo)本采集與送檢是目前臨床實(shí)驗(yàn)室診斷質(zhì)量保證中較為薄弱的環(huán)節(jié),嚴(yán)重影響臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)感染樣本中致病菌的分離培養(yǎng)的陽性率和醫(yī)院感染病原體監(jiān)控,也影響臨床診斷,合理選用抗菌藥物,降低耐藥菌的產(chǎn)生和提高感染的治愈率,而且對(duì)預(yù)測(cè)或及時(shí)發(fā)現(xiàn)醫(yī)院感染的暴發(fā)流行、杜絕感染蔓延、研究醫(yī)院感染的發(fā)病機(jī)制和環(huán)節(jié)、制定有效的醫(yī)院感染控制措施等,均具有十分重要的意義。嚴(yán)格實(shí)施正確的微生物標(biāo)本送檢和檢驗(yàn)方法,是做好醫(yī)院感染病原體監(jiān)測(cè)的關(guān)鍵。鑒此,希望臨床各科能按照本操作規(guī)范采樣送檢。

一、醫(yī)院感染標(biāo)本的采集和運(yùn)送基本原則

1.發(fā)現(xiàn)醫(yī)院感染應(yīng)及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查,我院總的醫(yī)院微生物標(biāo)本送檢率應(yīng)不低于70%。

2.盡量在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本。

3.標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作,減少或避免機(jī)體正常菌群及其他雜菌污染。

4.標(biāo)本采集后立即送至實(shí)驗(yàn)室,床旁接種可提高病原菌檢出率。

5.以棉拭子采集的標(biāo)本如咽拭子、肛拭子或傷口拭子,應(yīng)立即送檢。

6.盛標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌處理,但不得使用消毒劑。

7.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來源和檢驗(yàn)?zāi)康?使實(shí)驗(yàn)室能正確選用相應(yīng)的培養(yǎng)基和適宜的培養(yǎng)環(huán)境,必要時(shí)應(yīng)注明選用何種抗菌藥物。

二、常見醫(yī)院感染標(biāo)本送檢方法

1.血液與骨髓

①通常采血部位為肘靜脈。疑似細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí),以肘動(dòng)脈或股動(dòng)脈采血為宜。切忌在靜脈點(diǎn)滴抗菌藥物的靜脈處采取血標(biāo)本。

②采血部位的局部皮膚應(yīng)嚴(yán)格消毒。將采集的血液注入血培養(yǎng)基前,應(yīng)更換針頭或過火消毒針頭。血培養(yǎng)瓶應(yīng)在避光室溫中保存,不必置冰箱保存。

③每次采血量成人5一10ml,嬰幼兒l一5ml,培養(yǎng)基與血液之比以lO:1為宜,以稀釋血液中的抗菌藥物、抗體等殺菌物質(zhì)。

④懷疑菌血癥應(yīng)盡早采血,體溫上升階段采血可提高陽性率,但要防止因等待而延誤時(shí)機(jī)。對(duì)已用抗菌藥物而又不能停藥者,可在下次用藥前采血。

⑤每例病人至少采血兩次,間隔0.5一lh,以利于提高陽性率和區(qū)分感染菌與皮膚污染菌。

⑥對(duì)疑為細(xì)菌性骨髓炎或傷寒病人,在病灶部位或髂前(后)上棘處嚴(yán)格消毒后抽取骨髓lml作增菌培養(yǎng)。

2.尿液

①中段尿:女性采樣前應(yīng)先用肥皂水或0.1%高錳酸鉀溶液沖洗外陰部及尿道口;男性須翻轉(zhuǎn)包皮沖洗,用O.1%新潔爾滅消毒尿道口.滅菌紗布擦干后收集標(biāo)本。

②導(dǎo)尿管導(dǎo)尿采樣可減少污染。對(duì)留置導(dǎo)尿者,可用碘酒消毒尿道口處的導(dǎo)尿管壁,用空針細(xì)針頭斜穿管壁抽吸尿液。或消毒后解開接口,棄去導(dǎo)尿管前段尿液、留無污染的膀胱內(nèi)尿液數(shù)毫升送檢。不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本。

③尿厭氧菌培養(yǎng),或嬰幼兒中段尿采集困難,或培養(yǎng)結(jié)果與病情不符時(shí),可經(jīng)恥骨上皮膚穿刺采集無污染的膀胱內(nèi)尿液。

④送檢標(biāo)本以早晨第一次尿液為佳。

⑤室溫下尿標(biāo)本耽擱稍久,可致尿內(nèi)細(xì)菌濃度明顯增加而影響病原菌與污染菌的區(qū)分。不能立即送檢者,可暫存4℃冰箱。

3.痰液

①咳痰:清水反復(fù)漱口后用力咳嗽,從呼吸道深部咳出新鮮痰液于無菌容器送檢。痰量極少者可用45℃的lO%氯化鈉溶液霧化吸入導(dǎo)痰。

②對(duì)咳嗽乏力或昏迷病人,可用吸痰管經(jīng)鼻腔或口腔抵達(dá)氣管腔內(nèi)吸引痰液。用纖維支氣管鏡可直接在病灶部位采集高濃度的感染病原菌,但不能完全避免咽喉部正常菌群污染。

③雙側(cè)肺部感染伴人工氣道如氣管切開或氣管插管患者,可用吸痰管經(jīng)人工氣道插至肺支氣管水平吸引痰液。

④對(duì)重癥、難治、或伴免疫抑制、或疑似厭氧菌引起的醫(yī)院內(nèi)肺部感染,可采用環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引(TTA)、經(jīng)胸壁穿刺肺吸引(LA)、經(jīng)纖維支氣管鏡或人工氣道作防污染雙套管毛刷(PSB)或防污染支氣管肺泡灌洗(PBAL)采集無口咽部菌群污染的痰液,進(jìn)行感染病原學(xué)診斷。

⑤痰標(biāo)本不能及時(shí)送檢者,可暫存4℃冰箱。如果室溫下延擱數(shù)小時(shí),定植于口咽部的非致病菌可呈過度生長,而肺炎球菌、葡萄球菌和流感桿菌檢出率則明顯下降。

4.傷口、燒傷創(chuàng)面與膿液

①用無菌生理鹽水擦洗病灶表面后,用棉拭于取病灶深部的膿液和分泌物,置運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。

②對(duì)未漬破的膿腫宜用碘酒、酒精消毒皮膚后,以無菌注射器抽取膿液送檢:也可于切開排膿時(shí)用無菌棉拭子采樣。

5.糞便

①排便后,挑取有膿血、粘液部分的糞便約2—3g(液狀糞便則取絮狀物),盛于滅菌廣口瓶或蠟紙盒送檢。用棉拭子挑取糞便插入Cnry—BLair運(yùn)送培養(yǎng)基或PH7.0的磷酸鹽甘油中送檢,可提高病原菌檢出率.

②對(duì)不易獲取糞便者或嬰幼兒,可用直腸拭于(又稱肛拭)采集。將拭子前端用無菌甘油水濕潤,然后插入肛門約4—5cm(幼兒約2—3cm)處,輕輕旋轉(zhuǎn)擦取直腸表面粘液后退出置運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。

6.咽拭、口腔拭子

①病人清水嗽口后.由檢查者將其舌外拉使懸雍垂盡可能向外牽引,棉拭子越過舌根到咽后壁或懸雍垂的后側(cè),反復(fù)擦拭數(shù)次,插入運(yùn)送培養(yǎng)基。棉拭子應(yīng)避免觸及舌、口腔粘膜和唾液。

②對(duì)化膿性扁桃體炎或口腔念珠菌病,用棉拭子在病灶部位擦拭數(shù)次即可。

7.漿膜腔積液、腦脊液

①漿膜腔積液包括胸水、腹水如心包液、關(guān)節(jié)液和鞘膜液等.以嚴(yán)格無菌操作抽取數(shù)毫升液體置無菌試管或小瓶送檢。對(duì)易自凝的標(biāo)本可添加抗凝劑。

②嚴(yán)格無菌操作下采取腦脊液數(shù)毫升置于無菌試管。標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢,以防細(xì)菌死亡。疑似有腦膜炎奈瑟菌時(shí),應(yīng)注意保暖,不可置冰箱保存。

8.生殖道標(biāo)本

①根據(jù)不同感染種類和病變特征采集不同的標(biāo)本。采集尿道標(biāo)本時(shí),應(yīng)先用生理鹽水局部清洗,以無菌棉拭子插入尿道口l一2cm停留十余秒鐘。輕輕旋轉(zhuǎn)拭子后退出.

②對(duì)外陰部糜爛、潰瘍者,經(jīng)生理鹽水清洗后用棉拭子擦取病灶邊緣的分泌物。

③陰道和官頸口分泌物須在窺陰器下用長棉拭子采集。

④子宮內(nèi)分泌物需用無菌導(dǎo)管抽取.導(dǎo)管外套一層保護(hù)膜,插入子宮后再刺穿該膜予負(fù)壓吸引,可減少陰道菌群污染。

⑤女性盆腔膿腫,應(yīng)在陰道局部消毒后,由直腸子宮凹陷處進(jìn)針抽取。

⑥前列腺液需進(jìn)行前列腺按摩獲取。

9.組織標(biāo)本

①表淺的感染組織和各種竇道標(biāo)本可用棉簽擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手術(shù)切除。對(duì)竇道和痰管應(yīng)深部刮取管壁組織。

②深部組織標(biāo)本可經(jīng)皮膚穿刺采集或手術(shù)切取。標(biāo)本置無菌容器并加少量生理鹽水以保濕度,或置肉湯增菌液,或置血平皿送檢。

③尸檢標(biāo)本應(yīng)于死后20h內(nèi)采取,以防腸道等菌群侵入引起污染。

④作病原體分離的組織標(biāo)本,不可用福爾馬林固定。疑有污染的較大組織塊,可用燒紅的烙鐵燒灼其表面或置沸水中5—10秒鐘使表面變白消除污染后,再用無菌器械切開組織,取中央部位組織送檢。

10.靜脈導(dǎo)管

從病人體內(nèi)拔出靜脈插管,用無菌技術(shù)剪去導(dǎo)管體外部分。體內(nèi)段導(dǎo)管立即置血平皿上作滾動(dòng)涂布接種。不能作床旁接種者,將導(dǎo)管置含有少量生理鹽水的無菌試管內(nèi)送檢。也可將剪下的導(dǎo)管體內(nèi)段置肉湯增菌液或置于血培養(yǎng)液內(nèi),但不能區(qū)分導(dǎo)管感染菌與少量的定植菌。