SOP文件:酯酶染色中性非特異性脂酶(α—NAE)染色
SOP文件:酯酶染色-中性非特異性脂酶(α—NAE)染色
[方法學]
酯酶染色的方法很多，根據與pH底物等不同作用，將常用的酯酶染色法分為兩大類，即特異性酯酶染色和非特異性酯酶染色。后者又可分為3類：①中性非特異性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。②酸性非特異性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。②堿性非特異性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。中性非特異性酯酶染色是單核細胞與粒細胞白血病區別的重要方法，一般實驗室可選用此法。
[原理]
α—乙酸萘酚經酯酶水解產生萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞漿中。
[試劑]
1.α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸餾水混合液100m1，溶解后貯于磨口帶塞三角瓶內，4℃保存，可使用半年。
2.pH7.4磷酸鹽緩沖液：0.07MNa2HPO4(即Na2HPO4)
3.基質液：磷酸鹽緩沖液82ml，緩慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1.6ml(滴速約每分鐘40滴)，邊加邊用力振搖。根據5分鐘后，加堅牢藍B80mg，劇烈振搖10分鐘，立即過濾，濾液兩杯，各40ml。
4.氟化鈉基質液：稱取氟化鈉(NaF)61mg加入上述其中基質液1杯內，混勻后，標上標記。
[操作]
(1)新鮮涂片兩張，分別標上NSE和NaF記號，滴加10%甲醛生理鹽水，固定5分鐘，用自來水輕輕沖洗，當心血膜脫落，晾干。
(2)兩張涂片同時放入各自染色杯內，37℃水浴1小時。
(3)取出后水洗，晾干后鏡檢。不用復染。
[結果觀察]
在胞漿內若有棕黑色或灰黑色彌漫性顆粒沉淀者為陽性，細胞腦漿為黃色者為陰性。
[臨床意義]
1.陽性：單核細胞和組織細胞呈強陽性，但可被氟化鈉抑制;巨核細胞及血小板呈陽性;早幼粒細胞白血病時早幼粒細胞可陽性，且不受氟化鈉抑制。
2.弱陽性及陰性：粒細胞、淋巴細胞一般為陰性，若有弱陽性也可被氟化鈉抑制。
3.臨床鑒別：主要用于鑒別急性單核細胞性白血病與急性粒細胞性白血病，前者NSE陽性，且受氟化鈉(NaF)抑制;而后者NSE陰性，若有陽性也不受氟化鈉抑制。
[附注]
(1)堅牢藍B和氟化鈉可小包分裝后干燥器保存
(2)基質液配制過程中要振搖，以促使基質溶解。冬天配制時應適當加溫(置于37℃水箱操作)。基質液現配現用，不能保存，過濾后應盡快試驗，以免大量沉淀物析出，影響染色效果。
篇2:工貿染色機安全操作規程
1、染色工上崗前要經過安全培訓并考試合格方可上崗操作。
2、工作時要勞保穿戴整齊并符合要求方可工作。
3、每天工作前要先檢查設備狀況,設備如有安全隱患,不得操作設備。
4、操作蒸汽加熱水時打開控制閥不能太急,同時蓋好缸蓋,防止沸水燙傷。
5、做吊染時身體各部位不能伸入吊架下,防止吊架脫落傷人。
6、如操作蒸鍋,必須由取得特種設備操作許可證的人員并嚴格按蒸鍋操作規程的要求操作。
7、所有染料、助劑的領用必須遵循定人、定時、定量的原則,向缸內投放時防止灼傷。
8、保持消防通道的暢通,嚴禁堵塞通道;隨時清除地面積水,防止摔傷。
9、每天工作結束后必須切斷水、電、汽,清理設備。
篇3:SOP文件:酸性磷酸酶(ACP)染色
SOP文件:酸性磷酸酶(ACP)染色
[原理]
酸性磷酸酶在酸性環境中水解甘油磷酸鈉，產生磷酸根。磷酸根與硝酸鉛作用生成磷酸鉛，定位于胞漿中的磷酸鉛再與硫化銨反應生成棕黑色硫化鉛沉淀。
[試劑]
1.2mol/L乙酸緩沖液(pH4.7)：1mol/L乙酸100ml加1mol/L氫氧化鈉54.4ml，再加蒸餾水至500mL。
2.孵育液：乙酸緩沖液12m1，508/L硝酸鉛2m1，32g/L β—甘油磷酸鈉4ml，蒸餾水74ml。
3.硫化銨溶液：硫化銨1—2ml加蒸餾水到100m1。
4.4.28/L甲基綠：甲基綠2g加蒸餾水100ml。
[操作]
(1)新鮮涂片滴加95%乙醇10滴，固定10分鐘。
(2)水洗后晾干。放入孵育液37℃2—4小時。
(3)水洗數次，置于10g/L硫化銨染色3分鐘;
(4)自來水沖洗后，用20g/L甲基綠復染10分鐘，水洗，待干后鏡檢。
[臨床意義]
(1)單核細胞和組織細胞呈陽性反應。
(2) Gaucher3細胞呈強陽性反應，而尼曼—匹克(Nie-mann-Picks)氏細胞為陰性。
(3)毛細胞性白血病常為陽性反應(加1—酒石酸后不被抑制)。
(4) T淋巴細胞為陽性。且被酒石酸抑制;而B淋巴細胞為陰性。
[附注]
(1)涂片要新鮮，并應盡早固定染色。若不能及時測定，應固定后放冰箱保存。
(2)硫化銨試劑出現深黃色，提示有大量硫離子消耗，若染色效果不佳，應先考慮硫化銨試劑變質，應予更換后再做試驗。